تشخيص سرمي عفونت SARS-CoV-2 در اثر واكنش تداخلی ايمونولوژيك کروناويروسهاي انسانی از جمله SARS-CoV-1، MERS-CoV، OC43، E229، HKU1 و NL63 با محدودیت روبرو است. از اینرو، محققین در مطالعه ها درصدد بر آمدند تا پاسخهای ایمنی هومورال به پپتیدهای SARSCoV-2 را مورد مطالعه قرار دهند. این پاسخهای ایمنی میتواند باعث ایجاد تمایز بین SARS-CoV-2 و سایر کروناويروسهاي انسانی شود. در این مطالعه، محققین تعدادی نمونه از افرادی که به کروناویروسهای مختلف مبتلا بوده اند را جمع آوری کرده و با نتایج افراد سالم مقایسه نموده اند. نتایج بررسی آماری به روش رگرسیون خطی و مقیاسگذاری چند بعدی منجر به تشخیص 29 اپیتوپ خطی SARS-CoV-2 گردید که با پلاسمای افرادی که عفونتهای SARS-CoV-2 بدون علامت، خفیف یا شدید داشتند، واکنش ایمنی نشان دادند. در این مطالعه از یک سیستم آرایه ای پپتیدی استفاده شده است. آرایه پپتیدی استفاده شده یک ریزآرایه قابل برنامه ریزی برای کشف اپیتوپها است که میتواند تا سه میلیون پپتید خطی مجزا را روی یک اسلاید شیشه ای با ابعاد 75 میلیمتر در 26 میلیمتر جای دهد. هر آرایه پپتیدی HCoV به 12 زیرآرایه تقسیم می شود، و هر زیر مجموعه شامل تقریباً 172000 پپتید خطی 12-آمینو اسیدی غیر تکراری است.
در این مطالعه، پاسخ ایمنی 100 نمونه پلاسمای جمع آوری شده در دو مقطع زمانی از 50 بیمار مبتلا که عفونت فعال یا اخیر SARS-CoV-2 آنها توسط qPCR تأیید شده است (گروههای 1، 2 و 3)، مورد بررسی قرار گرفته است. گروه 4 شامل 11 نمونه از افرادی بود که سابقه عفونت با SARS-CoV-1 را داشته اند. گروه 5 نیز شامل نمونه های 10 فرد سالم و گروه 6 نیز شامل نمونه های 11 بیمار با سابقه عفونت با سایر کروناویروسهای انسانی بودند. گروههای 4، 5 و 6 به عنوان گروههای کنترل مورد توجه قرار گرفتند. نمونه های پلاسما به مدت نیم ساعت در دمای C˚56 غیرفعال گردیده و با نسبت 1 به 50 رقیق شد. سپس، نمونه های پلاسمای آماده شده به آرایه پپتیدی اضافه و با آنتی بادیهای IgG و IgM انکوبه شده و در ریزآرایه مورد مطالعه قرار گرفتند.
داده های فلوئورسانسی برای تمام پپتیدهای مورد نظر که از تصاویر اسکن شده ریزآرایه برای آنتی بادیهای IgG و IgM بدست آمده بوند، برای تمام آرایه های پپتیدی HCoV به واحدهای دلخواه (AU) تبدیل شده و پس از اصلاح پاسخ زمینه نرمال گردیدند تا از بروز هرگونه تغییرات بین آزمایشی جلوگیری شود. وجود حداقل سه پپتید فعال متوالی در نمونه هایی با عفونت SARS-CoV-2 که در گروه های کنترل غیرفعال بوده اند، برای شناسایی اپیتوپهای فعال در SARS-CoV-2 شناخته شدند. نتایج بررسی های نهایی برای آنتی بادی IgG بیانگر این بود که 29 اپیتوپ زیر در پلاسمای افراد مبتلا به عفونت SARS-CoV-2 پاسخ ایمنی تولید میکنند. همچنین، نتایج آنالیزها برای آنتی بادی IgM بیانگر این بود که تنها یک اپیتوپ خطی MADSNGTITVEELKKLLEQW در غشاء گلیکوپروتئین وجود داشت که در 19% موارد با نمونه های افراد بیمار با شدت بیماری متوسط و در 37% موارد با نمونه های افراد بیمار با شدت بیماری شدید، پاسخ ایمنی نشان میدهد.
اطلاعات بیشتر : www.nature.com/articles/s42003-021-01743-9?fbclid=IwAR3EtmV34dfpQk0mtAVWKl5he1sDmOmXyBudA6OGxt_QjIYWKQ1iAQyPZXU